多糖通过抑制 PI3K/AKT 依赖性磷酸甘露糖异构酶逆转奥沙利铂耐药结肠癌细胞的耐药性。
摘要来源：前药理学。 2024 年；15：1367747。 Epub 2024 年 3 月 21 日。PMID：38576495
摘要作者：马丽君、艾芳芳、肖红艳、王芳、石磊、白雪红、朱永照、马文平
文章所属单位：马丽君摘要：
本实验旨在通过实验探讨枸杞多糖联合奥沙利铂（OXA）对逆转结肠癌细胞耐药性的作用。我们还旨在探索这种效应背后的可能机制。最后，我们的目的是确定多糖的潜在目标通过网络药理学和分子对接，研究结肠癌（CC）中ide（LBP）的作用。利用侵袭试验评估结肠癌细胞的侵袭能力。使用迁移测定和伤口愈合测定评估这些细胞的迁移能力。使用流式细胞术进行细胞周期分析。使用免疫荧光和蛋白质印迹法测定磷酸甘露糖异构酶（PMI）和G2（ABCG2）蛋白的ATP结合盒转运蛋白的表达水平。使用蛋白质印迹法测定磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI3K)、蛋白激酶 B (AKT)、B 细胞淋巴瘤 2 (Bcl-2) 和 BCL2 相关 X (Bax) 的表达水平。 40只BALB/c裸鼠购自北京维通丽华用于分析。将小鼠随机分为八组。他们使用 HCT116 和 HCT116-OXR 细胞来制备结肠癌异种移植模型，然后用 PBS、LBP (50 mg/kg)、OXA (10 mg/kg) 或 LBP + OXA (50 mg/kg + 10 mg/kg) 进行治疗。千克）。测量治疗模型小鼠的肿瘤重量和体积，并使用苏木精和伊红染色评估器官毒性。然后使用免疫组织化学评估 PMI、ABCG2、PI3K 和 AKT 蛋白的表达水平。此外，使用免疫荧光和蛋白质印迹分析 PMI 和 ABCG2 表达水平。通过分析探讨了枸杞多糖在结肠癌中的活性成分和可能的靶点。 GeneCards 用于识别 CC 目标，并使用在线维恩分析工具来确定这些与 LBP 活性成分之间的交叉目标。使用 STRING 和 Cytoscape 构建了用于交叉目标蛋白相互作用的 PPI 网络以及用于交叉目标蛋白与 PMI 之间相互作用的 PPI 网络。为了获得CC中LBP的假定靶点，我们进行了GO功能富集和KEGG通路富集分析。与HCT116-OXR空白治疗组相比，HC的侵袭和迁移能力T116-OXR 细胞在 LBP + OXA（2.5 mg/mL LBP，10 μMOXA）组中受到抑制 (0.05)。 LBP + OXA（2.5 mg/mL LBP，10 μMOXA）组中的细胞被发现停滞在细胞周期的 G1 期。研究发现 PMI 的敲低会下调 PI3K、AKT 和 Bcl-2 (0.05)，同时会上调 Bax (0.05)。用多糖治疗后，40 个结肠癌皮下肿瘤模型显示肿瘤尺寸减小。 LBP治疗后肝脏指数无差异（>0.05）。然而，OXA 组和 LBP + OXA 组的脾脏指数下降 (<0.05)，可能是奥沙利铂的副作用。免疫组织化学、免疫荧光和蛋白质印迹显示，LBP + OXA 治疗降低了 PMI 和 ABCG2 表达水平（<0.05）。此外，免疫组织化学显示，LBP + OXA 处理降低了 PI3K 和 AKT 的表达水平（<0.05）。网络药理学分析揭示了45种枸杞子活性成分，包括类胡萝卜素、苯丙素、槲皮素、叶黄素和其他多酚。它还揭示了LBP的146个治疗靶点，包括AKT、SRC、EGFR、HRAS、STAT3和MAPK3。 KEGG通路富集分析显示，LBP靶蛋白富集于肿瘤相关信号通路、PI3K/AKT信号通路、IL-17信号通路等通路。最后，分子对接实验表明，LBP 活性成分与 ABCG2 和 PMI 结合良好。我们的实验表明，PMI 敲低下调 PI3K、AKT 和 Bcl-2，上调 Bax。这一发现证实了PMI通过调节PI3K/AKT通路发挥耐药作用，为研究LBP与OXA联合逆转结肠癌细胞耐药机制奠定了基础。我们的实验表明，枸杞多糖联合奥沙利铂可以抑制肿瘤生长。 LBP没有表现出肝或脾毒性。枸杞多糖联合奥沙利铂可下调 PMI、ABCG2、PI3K、aAKT；因此可能对晚期转移性结肠癌的治疗具有积极意义。我们的网络药理学分析揭示了枸杞多糖治疗CC的核心靶点及其富集途径，进一步验证了我们的实验结果，显示了多成分、多靶点、多途径的协同作用LBP 在 CC 中的药物逆转作用。总体而言，本研究结果为未来CC的临床治疗提供了新途径。