白藜芦醇通过表观遗传 lncRNA GAS5 调节 miR-455-5p/PTEN 通路，防止顺铂诱导的耳毒性。
摘要来源：Int Immunopharmacol。 2024 年 6 月 24 日；138:112464。 Epub 2024 年 6 月 24 日。PMID：38917526
摘要作者：吴文进、李英儒、何景春、杨军、刘玉鹏
文章所属单位：吴文进
摘要：背景：我们之前的研究表明，白藜芦醇通过上调针对 PTEN 的 miR-455-5p 来对抗 DDP 诱导的耳毒性。本研究旨在阐明白藜芦醇保护作用中涉及 GAS5 和 DNA 甲基转移酶 1 (DNMT1) 的潜在机制。
方法：采用荧光素酶报告基因测定和 RNA 免疫沉淀 (RIP) 测定来研究 GAS5 之间的结合和 miR-455-5p，以及 miR-455-5p 和 PTEN 之间。用 DDP 处理的 HEI-OC1 细胞用 GAS5、si-GAS5、DNMT1、si-DNMT1 和 miR-455-5p 模拟物以及 PTEN 的载体转染。随后，他们分别或联合接受白藜芦醇治疗和 DDP 治疗。使用 MethyPrimer 鉴定 GAS5 启动子中 CpG 岛的分布，并进行甲基化特异性 PCR (MSP) 以确定 GAS5 的甲基化水平。利用染色质免疫沉淀 (ChIP) 来检查 DNMT1 和 GAS5 之间的相互作用。分别使用 CCK-8 测定、CAT 测定、TUNEL 染色和流式细胞术评估 HEI-OC1 细胞的活力、过氧化氢酶 (CAT) 活性、细胞凋亡和 ROS 水平。我们开发了体内小鼠模型来测量听觉脑干反应（ABR）阈值，同时采用 RT-qPCR 和蛋白质印迹分析来评估分子水平。
结果：我们的研究发现，GAS5 作为 miR-455-5p 的海绵，从而增加 DDP 处理的 HEI-OC1 细胞中 PTEN 的表达。用白藜芦醇治疗后，这个过程被逆转。重要的是，DNMT1 促进 GAS5 启动子的甲基化，导致 GAS5 表达的抑制。这种抑制增强了白藜芦醇对抗 DDP 诱导的 HEI-OC1 细胞凋亡和 ROS 的有效性，并增强了其对体内 DDP 耳毒性的保护作用。
结论：我们的研究强调了 DNMT1/GAS5/miR-455-5p/PTEN 轴作为增强白藜芦醇对抗 DDP 诱导的耳毒性的有效性的有前景的新途径的重要性。