细胞基质和生物制品的支原体测试：替代非微生物技术的回顾。
摘要来源：Mol Cell Probes。 2011年4月-6月；25(2-3):69-77。 Epub 2011 年 1 月 11 日。PMID：21232597
摘要作者：Dmitriy V Volokhov、Laurie J Graham、Kurt A Brorson、Vladimir E Chizhikov
文章隶属关系：美国美国食品和药物管理局，生物制剂评价和研究中心，疫苗研究和审查办公室，病毒产品部，方法开发实验室，HFM-470, 1401 Rockville Pike, Rockville, MD 20852, USA。 [电子邮件受保护]
摘要：支原体，特别是物种支原体和胆原体属，已知是细胞的偶然微生物污染物生产生物制品的文化。这对开发和制造用于治疗用途的细胞衍生生物和生物制药产品的研究实验室和商业设施的支原体污染风险提出了严重关注。这些产品或加工中间体可能存在未被检测到的支原体污染，这对患者来说存在潜在的安全风险，对生物制药生产商来说也存在商业风险。为了最大限度地降低这些风险，在细胞培养基质中生产的生物制剂的制造过程中对病毒和支原体等外来因子进行监测。目前美国药典、欧洲药典、日本药典和美国食品和药物管理局推荐的生物制品支原体检测的“金标准"微生物检测方法包括在肉汤、琼脂平板和指示细胞中培养活支原体。尽管该程序能够在细胞基质和细胞衍生产品中高效检测支原体，但总体而言测试策略非常耗时（至少 28 天），并且需要对结果进行熟练的解释。这些传统测定所需的时间较长，不允许将其用于保质期短的产品或在常规过程测试期间及时做出通过/不通过的决定。 PCR 方法已存在数十年，但基于 PCR 的支原体检测方法和其他替代方法直到最近才被考虑应用于生物制品生产。应用替代的基于核酸、基于酶和/或重组细胞培养方法，特别是与有效的样品制备程序相结合，可以在分析通量、简单性和周转时间方面提供优于传统微生物方法的优势。然而，应用替代方法检测支原体的一个挑战仍然是这些替代方法是否可以提供与传统方法相当或更好的检测限。培养方法的软管。另一个挑战是核酸扩增技术 (NAT) 方法无法准确区分活支原体污染物和非活支原体污染物，这可能导致假阳性结果（例如来自灭活的原材料等）。我们的综述概述了这些替代方法，并讨论了它们在生物制剂和细胞基质中支原体检测中应用的优缺点。