紫檀芪通过雷帕霉素信号通路的机制靶标激活自噬，抑制原代脊髓神经元活性氧的产生和凋亡。
摘要来源：Mol Med Rep. 2018 Jan 9. Epub 2018 年 1 月 9 日。PMID：29328494
摘要作者：何静兰，肖-董辉、李宗虎、王晓英、付志安、沉那
文章归属：何静兰
摘要：自噬是一种重要的自适应机制，参与抑制脊髓神经元中的活性氧（ROS）。紫檀芪是一种天然植物提取物，已被证明具有抗氧化作用；然而，目前尚未研究紫檀芪是否可以激活自噬并保护脊髓神经元免受氧化应激。在本研究中，培养了 Sprague Dawley 大鼠的原代脊髓神经元。使用细胞计数试剂盒8分析检测紫檀芪的细胞毒性。细胞分别用不同剂量的紫檀芪处理 24 和 48 小时，并使用 H2O2 诱导 ROS 产生。进行蛋白质印迹分析以评估微管相关蛋白 1 轻链 3 (LC3)-II、Beclin-1、p62、p-p70S6K 和雷帕霉素 p 机制靶标 (mTOR) 的蛋白表达。此外，使用绿色荧光蛋白（GFP）-LC3检测法检测自噬水平和激活机制。使用2,7-二氯荧光素二乙酸酯和MitoSOX红染色来检测ROS的产生，并使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法来分析细胞凋亡百分比。 ATG5小干扰(si)RNA转染用于分析自噬的参与。在紫檀芪处理的神经元中观察到 LC3-II 和 Beclin-1 表达呈剂量依赖性增加，以及 p62 下降；然而，p-p70S6K 和 p-mTOR 的表达被紫檀芪抑制。紫檀芪增加了 H2O2 处理细胞中 LC3-II 的表达，并且 GFP-LC3 分析表明自噬体数量增加。此外，紫檀芪显着抑制H2O2诱导的ROS产生和细胞凋亡；然而，ATG5 siRNA 转染显着逆转了紫檀芪的保护作用。这些结果表明紫檀芪可能通过mTOR信号通路激活自噬来抑制脊髓神经元ROS的产生和凋亡。