[培养人视网膜色素上皮细胞蓝光诱导细胞凋亡与线粒体膜电位和细胞色素C的关系]。
摘要来源：中华眼科杂志。 2006 年 12 月；42(12)：1095-102。 PMID：17415967
摘要作者：蔡善君、米岩、毛永奎、周彦、刘冠健
文章所属单位：善君蔡
摘要：目的：研究蓝光对培养人视网膜细胞凋亡和线粒体通透性转变（MPT）的影响体外色素上皮 (RPE) 细胞。
方法：人类RPE 细胞暴露于蓝光（波长 470 -490 nm）。本研究由三个部分组成。第一部分研究了不同强度的蓝光对 RPE 细胞的影响。用(500+/-100)lx(第1组)、(2000+/-500)lx(第2组)和(3000+/-500)lx(第3组)蓝光照射细胞，然后照射24小时观察。第二部分研究了相同强度的不同持续时间的蓝光对 RPE 细胞的影响。对于RPE细胞各种亚型的研究，细胞用（2000+/-500）×蓝光照射6、12和24小时。为了研究线粒体膜电位，细胞被照射 3、6 和 12 小时。第三部分研究了用相同强度和持续时间的蓝光照射的细胞，但暴露后培养的延长时间不同。暴露后培养的延长时间为6、12、24和36小时。通过膜受损细胞的细胞核染色、凋亡细胞的 TdT-dUTP 末端切口标记 (TUNEL) 以及磷脂酰丝氨酸暴露的膜联蛋白 V 标记来量化暴露后不同时期的光毒性。使用透射电子显微镜来确定RPE 细胞超微结构的变化。通过罗丹明 123 染色和随后的流式细胞术测量线粒体膜电位 ( deltaPsim )。通过ELISA测定细胞色素C活性。通过比色法检测到 Caspase-3。
结果：第二部分研究第一组中 TUNEL 阳性标记细胞显示细胞皱缩、膜起泡、凋亡小体、染色质浓缩和断裂。透射电镜还观察到线粒体肿胀、线粒体内膜嵴消失、粗面内质网扩张和溶酶体增加。 (500 +/- 100) x 强度的蓝光不会对 RPE 细胞造成损伤，但观察到 delta Psim 减少。在第一部分研究中，在较高光强度下观察到细胞凋亡、细胞凋亡坏死和坏死百分比显着增加，以及 deltaPsim 显着降低。 ap增加视光百分比是对较短时间蓝光照射的主要反应。在第二部分研究中，经过较长时间照射的细胞中出现凋亡坏死和坏死百分比的增加以及 deltaPsim 的显着降低。第3部分研究中，暴露后培养6小时和12小时期间，细胞凋亡反应逐渐增强，暴露后24小时后发现更多的凋亡坏死或坏死。在暴露后培养的 6 小时延长中观察到 deltaPsim 的减少，并持续 48 小时。暴露后24小时和36小时细胞色素C浓度显着升高，Caspase-3活性没有任何变化。
结论：蓝光照射可在体外诱发人RPE细胞的损伤，包括凋亡、凋亡性坏死和坏死。这些变化是由触发线粒体通透性转变引起的，从而导致 deltaPsim 减少和细胞色素C的释放。deltaPsim可以作为蓝光诱导细胞凋亡的早期参数。